Анализ на сальмонеллез: методы и лабораторная диагностика

Анализ на сальмонеллез. Сальмонеллез — это опасная пищевая инфекция, которой можно заразиться при попадании в организм патогенной бактерии — сальмонеллы.

Возбудителем заболевания является бактерия в виде палочки с загнутым концом — сальмонелла. Проявление заболевания предполагает скорый инкубационный период — от нескольких часов до 5 суток, после чего болезнь можно заподозрить по характерным симптомам. Легкость в опознании состоит также в том, что эти симптомы не являются типичными для других кишечных инфекционных заболеваний ребенка.

Заражение, как правило, происходит при употреблении в пищу продуктов животного происхождения: мяса, яиц, молока, а также при контакте с инфицированными людьми. Вспышки сальмонеллеза чаще всего носят массовый характер, пик заболеваемости приходится на летний период.

Описание болезни сальмонеллез

Возбудители сальмонеллеза – бактерии рода Salmonella. Это небольшие грамотрицательные палочки, способные сохраняться в окружающей среде. Так, в воде они сохраняются около 5 месяцев, в мясе – около 6 месяцев, а в тушке птиц – более года.

На яичной скорлупе сальмонеллы сохраняются от 17 до 24 дней, однако известно, что при длительном хранении яиц бактерии могут проникать через скорлупу и размножаться в желтке. В некоторых продуктах, например, в молоке, масле, сырах, сальмонеллы могут размножаться, не меняя вкуса продукта.

Сальмонеллы распространены повсеместно. Резервуар и источник инфекции – крупный рогатый скот, свиньи, домашние и дикие птицы. При обследовании домашних животных и птиц, а также их мяса, сальмонеллы обнаружены у 1—5 % поголовья крупного рогатого скота, у 4—30 % всех обследованных овец, 5—15 % свиней.

При температуре 70°С сальмонеллы погибают в течение 5-10 минут.  В организм человека сальмонеллы попадают с пищей, чаще всего с плохо приготовленными птицей, яйцами, мясом. В стационарах возможен контактный путь передачи инфекции через полотенца, игрушки, манежи, руки. Люди очень легко заражаются сальмонеллезом.

Сальмонеллу также обнаружили у 50 % уток и гусей.  У здоровых животных эти бактерии не вызывают недомогания, звери и птицы просто носители бактерий. Однако у ослабленных животных они проникают из кишечника в органы и ткани и вызывают воспалительные заболевания. Человек с низким иммунитетом может заразиться и от страдающего сальмонеллезом.

Итак, через рот сальмонеллы попадают в желудочно-кишечный тракт, достигают тонкого кишечника, прикрепляются к клеткам эпителия кишечника и выделяют токсины. Через некоторое время бактерии проникают внутрь клеток эпителия.

Этому, как могут, препятствуют фагоциты (белые кровяные клетки, которые защищают организм, поглощая чужеродные частицы и микроорганизмы). В процессе поглощения развивается воспаление. А при разрушении сальмонелл выделяется эндотоксин, который стимулирует отток жидкости в просвет кишечника, усиление его перистальтики (сокращений).

Это приводит к развитию диареи и обезвоживанию. Из-за интоксикации организма и его обезвоживания нарушается работа сердечно-сосудистой системы – развивается тахикардия, а артериальное давление снижается. Обезвоживание также способствует нарушению микроциркуляции крови в почках, что приводит к развитию острой почечной недостаточности.

Сальмонеллез опасен не только обезвоживанием, у него есть и другие серьезные осложнения – инфекционно-токсический шок, перитонит, токсическое расширение кишки.

В большинстве (95-99 %) случаев дальше подслизистого слоя кишечника сальмонеллы не проникают. Однако иногда бактерии попадают в кровь, тогда развивается генерализованная форма сальмонеллеза. Обычно это происходит у пациентов со сниженным иммунитетом.

Экспресс-анализ бактерий рода сальмонелла

Анализ на сальмонеллез. Сальмонеллез относится к числу убиквитарных зооантропонозов. Экономический ущерб от сальмонеллеза складывается из падежа части заболевшего молодняка, отставания в росте и развитии переболевшего поголовья.

На сегодняшний день проблема профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, в том числе и птицы, имеет не только экономическое, но и социальное значение. Причину заболеваний связывают с поражением продуктов питания животного происхождения патогенными микроорганизмами.

Адаптация штамма Salmonella enteritidis к организму птицы, повышение его устойчивости создали предпосылки для передачи возбудителя от птицы к человеку и обратно. По данным ВОЗ, заболеваемость людей сальмонеллезом за последнее десятилетие возросла шестикратно, а в странах СНГ — в семь раз.

При этом этиологическая значимость S. enteritidis в заболевании людей возросла на 30%, животных – 75%, а число случаев обнаружения возбудителя в продуктах питания увеличилось на 50%.Можно  провести экспресс диагностику помета, смывов с поверхностей на территории сельскохозяйственного комплекса, а также контроль качества готовой продукции.

Какие  анализы сдают на сальмонеллез

Анализ на сальмонеллез. При подозрении на сальмонеллез больной сдает анализы, подтверждающие диагноз. Для анализа берут кал больного и пробы пищи. Из обязательных лабораторных анализов назначают биохимический анализ крови- почечные и печеночные пробы, уровень амилазы, глюкозы, электролиты, коагулограмма.

Специфические исследования: выявление возбудителя бактериологическим методом посева на питательную среду Плоскирева. Также с диагностической целью применяется постановка реакции кольцепреципитации, проведение серологических реакций – РА и реакция непрямой гемагллютинации (РНГА), реакция иммунофлюорисценции (РИФ).

Для оценки тяжести состояния пациента необходимы:

• электрокардиография;
• ультразвуковое исследование органов брюшной полости;
• рентгенография легких.

Лабораторная диагностика сальмонеллеза

Анализ на сальмонеллез. В качестве методов серологической диагностики применяют РНГА с комплексным и групповыми сальмонеллёзными эритроцитарными диагностикумами при постановке реакции в парных сыворотках с интервалом 5-7 дней.

При септикопиемическом варианте заболевания возможны посевы гноя или экссудата из воспалительных очагов. Для эпидемиологического контроля вспышек сальмонеллёза проводят бактериологический анализ остатков пищи, подозреваемой на заражённость, а также смывов с посуды.

Обязательным является использование сред обогащения (магниевая среда, селенитовая среда), нескольких дифференциально-диагностических сред (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агара), достаточно широкого набора биохимических тестов и набора моновалентных адсорбированных О- и Н-сывороток.

Основу диагностики составляет выделение возбудителя посевами рвотных и каловых масс, а при генерализованной форме и крови. Материалом для бактериологического исследования также могут служить промывные воды желудка и кишечника, моча, жёлчь.

Минимальный диагностический титр антител в РНГА -1:200. К сожалению, серологические методы в большинстве случаев представляют ценность только для ретроспективного подтверждения диагноза.

Диагностика болезни сальмонеллез у человека

Анализ на сальмонеллез. Если у человека появились признаки инфекционной болезни, которые схожи с сальмонеллезом, то следует незамедлительно обратиться за консультацией к терапевту.

Если есть болезненный дискомфорт в области живота, диарея, то, скорее всего, необходимо будет посетить хирурга и инфекциониста. В случае если клиническая картина болезни протекает остро и имеет стремительное развитие, лучше всего вызвать карету скорой помощи.

Сбор анамнеза при заболеванием сальмонеллез

На первом приеме врач постарается установить предварительный диагноз. Проводится беседа с пациентом, в ходе которой специалист должен узнать обо всех жалобах. Врач спросит о дате, когда появились первые симптомы, а также узнает, что употреблял в пищу больной.

Очень важно определить, если ли еще заболевшие. При подозрении на сальмонеллез диагностика будет включать и врачебный осмотр. Этот метод предполагает оценку состояния кожных покровов пациента. Ощупывается живот, выслушивается сердце, измеряется артериальное давление.

Вопросы, которые врач может задать пациенту:

• какие жалобы имеются;
• как давно началось заболевание;
• есть ли еще заболевшие;
• с каких симптомов, как быстро начиналось заболевание;
• какие продукты питания перед этим употреблял пациент, употребляли ли их другие люди.

Врачебный осмотр при заболеванием сальмонеллез

Анализ на сальмонеллез. Осмотр врача вместе с расспросом помогает установить предварительный диагноз и назначить правильное обследование.

Во время осмотр врач оценивает цвет и состояние кожи пациента, ощупывает живот. При необходимости – выслушивает легкие и сердце при помощи фонендоскопа, измеряет артериальное давление.

Копрограмма – общий анализ кала при заболевании сальмонеллез

Копрограмма не позволяет установить точный диагноз, но этот анализ помогает выявить воспалительный процесс в кишке.

При сальмонеллезе в общем анализе кала выявляются лейкоциты – белые кровяные тельца.

Пациент собирает небольшое количество кала в специальный флакончик и сдает его в лабораторию, где материал изучают под микроскопом.

Бактериологическое исследование при заболевании сальмонеллез

В лаборатории полученный от пациента материал наносят на питательную среду в специальной чашке Петри. Если в материале присутствуют сальмонеллы, то через несколько дней на питательной среде растут колонии. Их окрашивают по специальному методу и изучают под микроскопом. Возбудители сальмонеллеза имеют характерный внешний вид.

Материалы, которые можно использовать для бактериологического исследования:

• кал; рвотные массы;
• вода, полученная во время промывания желудка;
• кровь; моча; желчь;
• продукты питания, от которых могло произойти заражение.

Антибиотикограмма при заболевании сальмонеллез

Исследование чувствительности сальмонелл к антибактериальным препаратам. Антибиотикограмма помогает назначить правильное лечение.

Обычно антибиотикограмму проводят вместе с бактериологическим исследованием. На колонии микроорганизмов в чашке Петри воздействуют антибактериальными препаратами, отмечают, какие наиболее эффективно замедляют рост бактерий.

Серологические исследования при заболевании сальмонеллез

Серологические исследования при сальмонеллезе направлены на выявление антигенов возбудителя в организме пациента. Обычно для исследования берут кровь больного. В лаборатории проводят специальные иммунологические реакции, помогающие выявить антиген.

Исследование кала на сальмонеллез с помощью метода полимеразной цепной реакции

Salmonella (cальмонеллы) – это род грамотрицательных бактерий, насчитывающий свыше 2000 серотипов. Сальмонеллы попадают в организм при употреблении зараженной воды, яиц или мяса и способны вызывать сальмонеллез – острую кишечную инфекцию.

Анализ на сальмонеллез. При поражении кишечника и абдоминальных лимфатических узлов развивается сальмонеллезный гастроэнтерит, который сопровождается тошнотой, рвотой, диареей, спастическими болями в животе и лихорадкой. Если инфекция генерализуется, в 5-10 % случаев возможны тромбоэмболические осложнения, сальмонеллезный сепсис и менингит, пневмония, эндартериит, эндокардит, пиелонефрит.

Для диагностики сальмонеллеза, наряду с серологическими и бактериологическими исследованиями, используется метод полимеразной цепной реакции, позволяющий выявить ДНК бактерий рода Salmonella.

При поражении клеток ретикулоэндотелиальной системы развивается системная инфекция – брюшной тиф с лихорадкой, нарушением стула, сыпью в области живота и грудной клетки и симптомами поражения центральной нервной системы (заторможенностью, нарушением сознания и бредом).

Возможно бактерионосительство – острое (выделение возбудителя в течение 3 месяцев после выздоровления), хроническое (выделение возбудителя более 3 месяцев с момента выздоровления) и транзиторное (однократный положительный результат бактериологического или серологического исследования при отсутствии клинических проявлений заболевания).

Как правильно подготовиться к исследованию:

• исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов;
• не использовать слабительные препараты, ректальные свечи, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонны, пилокарпина и др.) и на окраску кала (железа, висмута, сернокислого бария), за 72 часов до сдачи кала.

Диагностика и анализы на сальмонеллез у животных

Бактериологический метод  диагностики сальмонеллеза

Анализ на сальмонеллез. Материал для исследования: при жизни – кал, сыворотка крови; посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод.

Микроскопия: методы окраски:  простой метод, по Граму; микрокартина:  палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно; грамотрицательные; спор не образуют; капсулу не образуют; подвижны (за исключением S.pullorum).

Культуральные свойства: все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки, близкие к эшерихиям; на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка; на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии; на среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии, на среде Левина – светло-фиолетовые колонии.

Культивирование: посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др, накопительные; особенности выделения возбудителя: факультативные анаэробы; оптимальная температура 37oС; срок культивирования 18-20 часов.

После выделения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий устанавливают их родовую принадлежность, затем дифференцируют до вида и сероварианта. С этой целью изучают их биохимические свойства и антигенное строение путем постановки пластинчатой реакции агглютинации (серологическая дифференциация).

Биохимические свойства:

• обладают высокой сахаролитической активностью;
• для установления родовой принадлежности проводят посевы на короткий «цветной ряд» (среды Гисса) при этом сальмонеллы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу;
• дальнейшее изучение для установления видовой принадлежности проводят путем посевов на длинный «цветной ряд», в состав которого входят углеводы, и другие тесты;

Серологический метод диагностики сальмонеллеза

Анализ на сальмонеллез. При положительном результате с групповой сывороткой испытания той же культуры, выросшей на скошенном МПА с отдельными монорецепторными сыворотками, входящими в смесь поливалентной сыворотки.

Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами – РИФ.

Серологический метод диагностики сальмонеллеза:

• используют РА с сывороткой крови: (кровью) при диагностике паратифозного аборта кобыл, поллуроза у кур;
• используют РА для дифференциации: выделенной культуры сальмонелл с целью определения их вида и сероварианта;
• у сальмонелл различают соматический термостабильный антиген и жгутиковый термолабильный антиген;
• культуру сальмонелл предварительно проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле. На основе общего для нескольких видов сальмонелл антигена они подразделяются на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита.

Осложнения сальмонеллеза

Если заболевание протекает в форме поражения желудка и кишечника, либо в форме тифа, то прогноз благоприятен – при правильном и своевременном лечении все пациенты выздоравливают. Если болезнь протекает в форме сепсиса, то 0,2 – 0,3% пациентов погибает.

Осложнения сальмонеллеза:

• коллапс;  резкое падение артериального давления. Обусловлено влиянием токсинов сальмонелл на сердце и сосуды;
• гиповолемический шок:  резкое падение артериального давления из-за потери большого количества жидкости;
• острая сердечная недостаточность:  нарушение функции сердца в результате действия токсина;
• острая почечная недостаточность:  нарушение функции почек в результате действия токсина;
• гнойные артриты:  гнойное воспаление суставов; остеомиелит:  гнойное воспаление костного мозга и кости;
• эндокардит:  воспаление внутренней стенки сердца; мочевые инфекции: пиелит, цистит;
• мозговой абсцесс:  гнойник головного мозга; абсцессы печени, почек, селезенки;
• менингит: – гнойное воспаление оболочки головного мозга;
• перитонит:  гнойное воспаление брюшины – оболочки, выстилающей изнутри полость живота;
• аппендицит:  гнойное воспаление червеобразного отростка; пневмония:  воспаление легких;
• мочевые инфекции: пиелит, цистит;

После излечения от сальмонеллеза всегда имеется вероятность рецидива.

Частые вопросы

Какие методы используются для анализа на сальмонеллез?

Для анализа на сальмонеллез используются различные методы, включая бактериологические, иммунологические и молекулярно-генетические методы. Бактериологический метод основан на выделении и идентификации сальмонелл в биологическом материале. Иммунологические методы включают электрофорез, иммуноферментный анализ и иммунохроматографию. Молекулярно-генетические методы, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяют определить наличие ДНК сальмонелл в образце.

Как проводится лабораторная диагностика сальмонеллеза?

Лабораторная диагностика сальмонеллеза включает несколько этапов. Сначала проводится сбор биологического материала, такого как кал, кровь или моча, у подозреваемого пациента. Затем проводится выделение и идентификация сальмонелл в этом материале с использованием бактериологических методов. Для подтверждения диагноза могут быть использованы иммунологические методы, такие как иммуноферментный анализ или иммунохроматография. При необходимости может быть применена молекулярно-генетическая диагностика с использованием ПЦР.

Какие преимущества имеет молекулярно-генетический метод анализа на сальмонеллез?

Молекулярно-генетический метод, такой как ПЦР, имеет несколько преимуществ. Во-первых, он позволяет быстро и точно определить наличие ДНК сальмонелл в образце. Во-вторых, этот метод может быть использован для детекции различных штаммов сальмонелл, что позволяет проводить эпидемиологические исследования и отслеживать источники инфекции. В-третьих, молекулярно-генетический метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что позволяет достоверно диагностировать сальмонеллез.

Полезные советы

СОВЕТ №1

При анализе на сальмонеллез рекомендуется использовать методы молекулярной диагностики, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР) или гибридизация ДНК. Эти методы позволяют быстро и точно определить наличие сальмонеллы в образцах.

СОВЕТ №2

При проведении лабораторной диагностики сальмонеллеза необходимо учитывать особенности культуры бактерий. Сальмонелла может быть чувствительна к определенным антибиотикам, поэтому рекомендуется проводить антибиотикограмму для определения эффективности лечения.

СОВЕТ №3

При сборе образцов для анализа на сальмонеллез необходимо соблюдать правила гигиены и стерильности. Это поможет избежать контаминации образцов и получить достоверные результаты исследования.